液相色譜對于多數(shù)人來說都是很好上手的儀器了，但是就算是用過幾年、經(jīng)驗豐富的分析員都會習(xí)慣于一些錯誤的操作，經(jīng)常導(dǎo)致一些儀器故障。
方便快捷的分析過程固然重要，但是為了多做樣品而忽略了一些必不可少的步驟，往往得不償失。
哪些操作不能做？哪些懶兒不能偷？那些小概率的故障師傅沒教怎么辦？液相使用過程中有哪四大關(guān)鍵因素要注意？
流動相不過濾。
因為塵埃或其它任何雜質(zhì)微粒都會磨損柱塞、密封環(huán)、缸體和單向閥，因此應(yīng)預(yù)先除去流動相中的任何固體微粒。
流動相在玻璃容器內(nèi)蒸餾，而常用的方法是濾過，可采用Millipore濾膜（0.2μm或0.45μm）等濾器。泵的入口都應(yīng)連接砂濾棒（或片）。
輸液泵的濾器應(yīng)經(jīng)常清洗或更換。
使用后沒有及時清洗泵
流動相不應(yīng)含有任何腐蝕性物質(zhì)，含有緩沖液的流動相不應(yīng)保留在泵內(nèi)，尤其是在停泵過夜或更長時間的情況下。
如果將含緩沖液的流動相留在泵內(nèi)，由于蒸發(fā)或泄漏，甚至只是由于溶液的靜置，就可能析出鹽的微細(xì)晶體，這些晶體將和上述固體微粒一樣損壞密封環(huán)和柱塞等。
因此，必須泵入純水將泵充分清洗后，再換成適合于色譜柱保存和有利于泵維護(hù)的溶劑（對于反相鍵合硅膠固定相，可以是甲醇或甲醇-水）。
流動相走空。
泵工作時要留心防止溶劑瓶內(nèi)的流動相被用完，否則空泵運轉(zhuǎn)也會磨損柱塞、缸體或密封環(huán)，最終產(chǎn)生漏液。
沒有流動相流出，又無壓力指示怎么辦？
可能是泵內(nèi)有大量氣體，這時可打開泄壓閥，使泵在較大流量（如5ml/min）下運轉(zhuǎn)，將氣泡排盡，也可用一個50ml針筒在泵出口處幫助抽出氣體。另一個可能原因是密封環(huán)磨損，需更換。
壓力和流量不穩(wěn)了？
原因可能是氣泡，需要排除；或者是單向閥內(nèi)有異物，可卸下單向閥，浸入丙酮內(nèi)超聲清洗。
有時可能是砂濾棒內(nèi)有氣泡，或被鹽的微細(xì)晶粒或滋生的微生物部分堵塞，這時，可卸下砂濾棒浸入流動相內(nèi)超聲除氣泡，或?qū)⑸盀V棒浸入稀酸（如4mol/L硝酸）內(nèi)迅速除去微生物，或?qū)Ⅺ}溶解，再立即清洗。
壓力為啥過高或過低？
可能是是管路被堵塞，需要清除和清洗。壓力降低的原因則可能是管路有泄漏。檢查堵塞或泄漏時應(yīng)逐段進(jìn)行。
在進(jìn)行梯度洗脫時，由于多種溶劑混合，而且組成不斷變化，因此帶來一些特殊問題，必須充分重視：
PS：（在液相色譜中對組分復(fù)雜的樣品采用梯度洗脫的方法。在同一個分析周期中，按一定程序不斷改變流動相的濃度配比，稱為梯度洗脫。
從而可以使一個復(fù)雜樣品中的性質(zhì)差異較大的組分能按各自適宜的容量因子k達(dá)到良好的分離目的。
梯度洗脫的優(yōu)點：1.縮短分析周期；2.提高分離能力；3.峰型得到改善，很少拖尾；4.增加靈敏度。但有時引起基線漂移。）
梯度洗脫的流動相選擇不當(dāng)。
要注意溶劑的互溶性，不相混溶的溶劑不能用作梯度洗脫的流動相。有些溶劑在一定比例內(nèi)混溶，超出范圍后就不互溶，使用時更要引起注意。
當(dāng)有機溶劑和緩沖液混合時，還可能析出鹽的晶體，尤其使用磷酸鹽時需特別小心。
忽略的空白梯度洗脫。
梯度洗脫所用的溶劑純度要求更高，以保證良好的重現(xiàn)性。進(jìn)行樣品分析前必須進(jìn)行空白梯度洗脫，以辨認(rèn)溶劑雜質(zhì)峰，因為弱溶劑中的雜質(zhì)富集在色譜柱頭后會被強溶劑洗脫下來。
用于梯度洗脫的溶劑需徹底脫氣，以防止混合時產(chǎn)生氣泡。
忽略了溶劑混合所帶來的粘度變化。
混合溶劑的粘度常隨組成而變化，因而在梯度洗脫時常出現(xiàn)壓力的變化。例如甲醇和水粘度都較小，當(dāng)二者以相近比例混合時粘度增大很多，此時的柱壓大約是甲醇或水為流動相時的兩倍。
因此要注意防止梯度洗脫過程中壓力超過輸液泵或色譜柱能承受的zui大壓力。
關(guān)于六通閥的正確使用和維護(hù)：
①樣品溶液進(jìn)樣前必須用0.45μm濾膜過濾，以減少微粒對進(jìn)樣閥的磨損。
②轉(zhuǎn)動閥芯時不能太慢，更不能停留在中間位置，否則流動相受阻，使泵內(nèi)壓力劇增，甚至超過泵的zui大壓力；再轉(zhuǎn)到進(jìn)樣位時，過高的壓力將使柱頭損壞。
③為防止緩沖鹽和樣品殘留在進(jìn)樣閥中，每次分析結(jié)束后應(yīng)沖洗進(jìn)樣閥。通常可用水沖洗，或先用能溶解樣品的溶劑沖洗，再用水沖洗。
關(guān)于色譜柱的使用和維護(hù):
菲羅門色譜柱的正確使用和維護(hù)十分重要，稍有不慎就會降低柱效、縮短使用壽命甚至損壞。
在色譜操作過程中，需要注意下列問題，以維護(hù)色譜柱。
調(diào)節(jié)流速太快。
避免壓力和溫度的急劇變化及任何機械震動。
溫度的突然變化或者使色譜柱從高處掉下都會影響柱內(nèi)的填充狀況；柱壓的突然升高或降低也會沖動柱內(nèi)填料，因此在調(diào)節(jié)流速時應(yīng)該緩慢進(jìn)行，在閥進(jìn)樣時閥的轉(zhuǎn)動不能過緩（如前所述）。
反沖色譜柱。
一般說來色譜柱不能反沖，只有生產(chǎn)者指明該柱可以反沖時，才可以反沖除去留在柱頭的雜質(zhì)。
否則反沖會迅速降低柱效。
預(yù)柱和保護(hù)柱
選擇使用適宜的流動相（尤其是pH），以避免固定相被破壞。有時可以在進(jìn)樣器前面連接一預(yù)柱，分析柱是鍵合硅膠時，預(yù)柱為硅膠，可使流動相在進(jìn)入分析柱之前預(yù)先被硅膠“飽和”，避免分析柱中的硅膠基質(zhì)被溶解。
避免將基質(zhì)復(fù)雜的樣品尤其是生物樣品直接注入柱內(nèi)，需要對樣品進(jìn)行預(yù)處理或者在進(jìn)樣器和色譜柱之間連接一保護(hù)柱。保護(hù)柱一般是填有相似固定相的短柱。保護(hù)柱可以而且應(yīng)該經(jīng)常更換。
【1】泵壓跳動，跳動范圍10bar左右。
解決方法：
1、原先小白頭有點臟，更換后尚未解決；
2、將主動閥上的閥芯取出后，發(fā)現(xiàn)有類似氣泡存在，浸入甲醇-水溶液超聲5min，以試著去除氣泡，重新將其安裝后再觀察，仍未解決；
3、更換新的閥芯，將其安裝后，不再有跳動，觀察一段時間后比較平穩(wěn)，成功解決。
【2】發(fā)生故障：
①plug homing over pressure。
② 灌注及設(shè)流速時均無壓力也不見液體流出。
③檢測器光閘不能復(fù)位④進(jìn)完大濃度樣品后，進(jìn)空白相應(yīng)位置也出峰。
可能原因：
①在線過濾器堵了。
②泵頭下單向閥堵了。
③有可能是檢測池臟了，也有可能是光路有點堵，再不行可能是燈壽命到了。
④小抹布臟了，需要換。
解決方法：
①在線過濾器卸下來，置燒杯，加純化水煮沸5-10分鐘后甲醇超一下一般就可以了，如果還堵的話就拿稀硝酸泡，還不行的話就換新的了，這本身是個消耗品。
②把泵頭下單向閥卸下來，兩個都有可能堵，剛卸下來時豎著在耳邊搖一搖是聽不到聲音的。簡單的拿洗耳球把單向閥吹吹就行了（注意方向），吹了沒反應(yīng)可以拿溶劑超聲，但不可水煮，一般超至在耳邊搖能聽見聲音就不影響實驗。
③先用溶劑把檢測池沖沖，用啥試具體樣品而定；若沖了還不行，把檢測池卸下，看燈能量，若能量還可以（有個幾千），可能得清洗光路了。di一次清洗的話建議還是叫工程師來，因為待清理的部件在檢測器的zui下方，有一個黑色片片，中間有一條縫，而且那一塊的螺絲都是八角的，卸起來很麻煩。
④把5個樣品盤都拿出來，可以看見里面有一個黑色突起（看不清用手電筒），平時進(jìn)樣針就是從那個地方吸樣的。手伸進(jìn)去就可以卸下來，里面有一個小白圈圈（用多了自然就黑了），換一個新的就行了，買儀器時一般配有10個。
